瞬時表達
HEK293表達系統(tǒng)可在哺乳動物細胞中進行快速的超高得率蛋白制備,該系統(tǒng)基于該細胞在特定表達培養(yǎng)基上的高密度培養(yǎng)。我們自主研發(fā)的轉染試劑與經(jīng)優(yōu)化的稀釋體系相結合,進行瞬時表達,可使蛋白表達量大幅度提高。
CHO細胞表達系統(tǒng)可分為瞬時表達和穩(wěn)定表達兩大體系,哺乳動物細胞自身具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能,其表達的重組蛋白在分子結構、理化性質和生物學功能方面最接近于天然的高等生物蛋白質分子,更有可能獲得與天然分子相同的生物活性,可在短期內獲得一定量的可溶性蛋白,同時可以滿足標簽切除、活性測定、HPLC檢測等,可用于基因產物的快速表達和小規(guī)模制備蛋白等方面。目前,瞬時表達技術廣泛應用于疾病診斷、抗體生產、疫苗開發(fā)等多個領域,為客戶提供靈活優(yōu)質的服務。
服務優(yōu)勢
1)低成本、高效的表達載體;
2)優(yōu)化的哺乳動物表達系統(tǒng);
3)翻譯后修飾和正確折疊的高產量表達;
4)豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
2)優(yōu)化的哺乳動物表達系統(tǒng);
3)翻譯后修飾和正確折疊的高產量表達;
4)豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
服務流程
Fig. 哺乳動物細胞瞬時轉染表達流程圖
服務周期
技術內容 | 周期 | 交付內容 | |
---|---|---|---|
基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) | 1-2周 | ||
載體構建 | 克隆至優(yōu)化的表達載體 | 1-2周 |
1.測序報告 2.質粒鑒定報告 |
質粒測序 | |||
大量質粒制備 | |||
表達及純化 | 細胞傳代培養(yǎng) | 1-2周 |
1.可行性報告 2.如表達可行,且QC檢測后有剩余樣品,提供0.1-0.5mg樣品 |
瞬時轉染HEK293/CHO細胞 | |||
蛋白純化 | |||
SDS-PAGE及UV分析 | |||
大量表達及純化(可選) | 1-2周 |
1.純化蛋白 2.SDS-PAGE報告 3.質檢報告 |
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應用
Fig. 瞬時轉染哺乳動物細胞純化page圖(Lane4和Lane5)
穩(wěn)定表達
與瞬時轉染不同,穩(wěn)定細胞系構建是指外源基因進入受體細胞并整合到細胞的染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因,經(jīng)過抗生素加壓篩選后最終得到可以穩(wěn)定表達蛋白的細胞株。從技術流程上看,穩(wěn)定細胞株的轉染流程是以瞬時轉染為基礎,先轉染哺乳動物細胞,再對細胞池篩選得到穩(wěn)定的細胞系,剔除未穩(wěn)定整合的細胞,得到有限稀釋的單克隆穩(wěn)定轉染細胞株。
穩(wěn)定細胞系廣泛應用于重組蛋白和抗體的生產、檢測分析、基因編輯、功能研究等各個領域,表達的蛋白、抗體穩(wěn)定性更高,批次差異更小。我們的Free Style CHO-S表達系統(tǒng)對培養(yǎng)基、轉染試劑及稀釋體系等條件進行了多方面的優(yōu)化,解決了轉染后的細胞易出現(xiàn)細胞結團的問題。
服務優(yōu)勢
1)細胞來源明確,無污染;
2)直接連續(xù)培養(yǎng),無需轉染;
3)可更高密度培養(yǎng);
4)穩(wěn)定表達蛋白與基因工程抗體;
5)比瞬時轉染得到的蛋白更穩(wěn)定,批間差更??;
6)GS-MSX基因共擴增技術,外源基因的拷貝會增加至幾百至幾千產量更高;
7)豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
2)直接連續(xù)培養(yǎng),無需轉染;
3)可更高密度培養(yǎng);
4)穩(wěn)定表達蛋白與基因工程抗體;
5)比瞬時轉染得到的蛋白更穩(wěn)定,批間差更??;
6)GS-MSX基因共擴增技術,外源基因的拷貝會增加至幾百至幾千產量更高;
7)豐富穩(wěn)定的細胞系培養(yǎng)及開發(fā)經(jīng)驗。
服務流程

Fig. 哺乳動物細胞瞬時轉染表達流程圖
服務周期
服務內容 | 周期 | 交付內容 | |
---|---|---|---|
基因合成及密碼子優(yōu)化(可選) | 1~2周 | ||
載體構建 | 克隆至表達載體 | 1~2周 |
1.測序報告
2.質粒鑒定報告
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質粒測序 | |||
大量質粒制備 | |||
瞬轉表達評估 | 瞬時表達 | 2周 | 1.評估報告 |
ELISA或WB檢測表達水平 | |||
穩(wěn)定細胞株開發(fā) | 穩(wěn)定轉染及篩選 | 12~20周 |
1.表達報告
2.2~3 株穩(wěn)定克隆 (可選)
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MTX 擴增及篩選 | |||
高表達克隆篩選及穩(wěn)定性篩選 | |||
細胞建庫 | |||
大量表達及純化(可選) | 2~3 周 |
1.純化蛋白
2.SDS-PAGE 報告
3.質檢報告
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